盡管譜係節點細胞在再生醫學中的應用前景廣闊，但基於傳統人為操作獲取譜係細胞單克隆的方法需要消耗大量時間和勞動力，獲取效率通常比較低，且無法以無標記、無酶活反應參與、非侵入式的方式獲取譜係細胞單克隆。此外，利用微流控技術雖然可以提高譜係細胞收獲效率，但這種方法無法獲得基於譜係特異性的細胞單克隆。因此，發展能夠高效富集譜係細胞單克隆的自動化整機技術顯得尤為重要。由於細胞-細胞/細胞-基質之間的粘附力變化是譜係細胞命運變化中的一個關鍵環節，通過調節流體剪切力大小可以實現以無標記、無酶活反應參與、非侵入式的方式分離/選擇具有不同粘附特性的譜係細胞單克隆，因此這種策略可以應用於基於細胞類型特異性的單克隆工程化獲取。

近日，betway体育下载 （廣州健康院）張驍研究員團隊提出一種基於結構微流體創新的譜係細胞單克隆自動化獲取策略，以無標記、無酶活反應參與、非侵入式的方式，在體細胞重編程過程出現的複雜譜係中實現了對特定譜係的單克隆性細胞的自動化獲取，並研發出基於結構微流體的細胞單克隆獲取整機技術（圖1）。該原創性策略被部署於廣州健康院前期自主研發的自動化幹細胞誘導培養裝備，提高了人誘導多能幹細胞（hiPSCs）單克隆的獲取效率與純度，提升了係統魯棒性（robustness）及縮短了體細胞重編程後持續純化hiPSCs（sub-cloning）的建係周期。相關研究成果以“Selecting Monoclonal Cell Lineages from Somatic Reprogramming Using Robotic-Based Spatial-Restricting Structured Flow”為題在國際權威學術期刊 Research 上在線發表。

在研究中，研究人員通過分析不同體細胞重編程過程中細胞粘附分子的表達水平變化情況，發現細胞多能性基因的表達水平與Integrin家族基因的表達量呈負相關性，而與Cadherin家族基因的表達量呈正相關性。由於Integrins是細胞與細胞外基質（ECM）相互作用的關鍵粘附分子，而Cadherins是細胞與細胞之間相互連接的重要分子，這意味著體細胞重編程轉變成多能幹細胞這一譜係命運變化過程中，細胞與ECM的連接可能會減弱，而細胞與細胞之間的連接可能會增強。為了證明這個假設，作者提出進一步通過設計平行平板流動腔實驗和免疫熒光實驗來進行驗證。實驗結果與預期假設相一致，並且平行平板流動腔實驗初步證明了流體剪切力有望成為分離/選擇特定類型粘附細胞的好技術路徑。

隨後，作者基於流體動力學原理設計了以可以產生局部結構微流體的細胞獲取微型挑針結構（PTMS），機械團隊克服了流場效果與多曲麵加工實現的難題，反複校驗加工結構，最終基於PTMS產生的結構微流體（PTMS-FLOW）實現了對基於空間限位譜係細胞的特異性挑取。此外，研究證明了PTMS-FLOW可根據流速變化在Z軸-h0的為常量的條件下，應對不同細胞類型的粘附力差異，實現以無標記、無酶活反應參與、非侵入式、和非接觸的方式對不同譜係細胞進行特異性的選擇。該研究證明了結構微流體是作為分離/選擇特定譜係類型粘附細胞的可自動化的技術路徑，為後續進一步研究譜係細胞單克隆的自動化獲取提供了理論基礎（圖2）。

為了將上述策略應用於對體細胞重編程過程中特定譜係的細胞的自動化獲取，作者團隊通過克服機械模塊控製和精準調度的難題，結合細胞光學成像和自適應算法，實現精準操控微結構的功能底部與細胞單克隆之間的Z軸間距和水平位移，從而確保精準操控PTMS-FLOW作用於單克隆性的譜係細胞上，以此實現在體細胞重編程過程出現的複雜譜係中快速獲取hiPSCs細胞單克隆的目標。

此外，作者團隊借助自動化整機技術的精確的流體操控能力，設計了一種雙挑模式（Dual Run Selection），通過使用兩次不同強度的剪切流體分別獲取不同類型粘附特性的譜係細胞，實現了對特定空間位置的hiPSCs譜係細胞單克隆的特異性選擇（圖3），並能為下遊hiPSCs實現特異性擴增提供純化（sub-cloning）能力。

該研究建立的整機技術通過大幅減少譜係細胞生成過程中的時間成本，以及人工操作量，使得譜係細胞獲取和培養起來更簡單。該研究為自動化生產特定譜係細胞用於臨床幹預提供了新的技術方案，並為再生醫學基礎研究提供更多自動化獲取譜係細胞的工具，從而從技術手段和方法學方麵促進再生醫學領域的基礎研究和應用落地。

廣州健康院陳學平博士、樊科高級工程師、盧俊高級工程師、張晟博士、董建華高級工程師及秦季生工程師為該論文的共同第一作者。廣州健康院張驍研究員為該論文的唯一通訊作者。該研究得到了中國科學院、廣東省科技計劃、廣州市科技計劃等項目的支持。

論文鏈接

圖1. 譜係細胞自動化獲取策略整機技術概要

圖2. 基於空間定位的結構微流體研究不同譜係細胞的粘附分離作用

圖3 基於譜係細胞粘附力的差異，應用PTMS-FLOW實現了對重編程多能幹細胞單克隆的選擇